Ψηφιακή PCR για EGFR T790M και C797S: Παρακολούθηση της αλληλουχικής αντοχής μετά τη θεραπεία TKI

Σύνοψη

Η αντίσταση στην θεραπεία με EGFR τείνει να φτάνει σε μια προβλέψιμη σειρά, και αυτή η εξέταση είναι χτισμένη γύρω από αυτή τη σειρά.Ενώ το C797S εμφανίζεται μετά από ένα παράγοντα τρίτης γενιάς που έχει αναπτυχθεί εναντίον του T790MΗ στόχευση και των δύο υποκαταστάσεων σε μια εξαιρετικά ευαίσθητη αντίδραση μετατρέπει μια ασαφή κλινική εντύπωση της εξέλιξης σε έναν ονομαστικό μηχανισμό διαφυγής.

Πώς Λειτουργεί

Η ψηφιακή PCR χωρίζει ένα ενιαίο προετοιμασμένο δείγμα σε χιλιάδες ανεξάρτητους διαχωρισμούς πριν ξεκινήσει η ενίσχυση.Έτσι, μετά την ποδήλατο το όργανο μετράει θετικά διαμερίσματα και εφαρμόζει στατιστικά Poisson για να αντλήσει έναν απόλυτο αριθμό μορίων χωρίς αναφορά σε μια τυποποιημένη καμπύληΟι ειδικοί ανιχνευτές διακρίνουν τη μεταλλαγμένη αλληλουχία από την άφθονη φύση.που έχει σημασία επειδή οι κλώνες διαφυγής συχνά αντιπροσωπεύουν ένα μικρό κλάσμα του κυκλοφορούντος υλικού τη στιγμή που η εξέλιξη γίνεται κλινικά ορατή.

Ενδείξεις

Το τεστ είναι κατάλληλο για ασθενείς που προχωρούν σε θεραπεία με κατευθυνόμενη στο EGFR, όπου ο μηχανισμός διαφυγής πρέπει να ονομαστεί πριν από την επιλογή της επόμενης γραμμής.και ιστούς μπορούν να χρησιμοποιηθούν όταν είναι διαθέσιμο φρέσκο δείγμαΥποστηρίζει επίσης τη σειρά δειγματοληψίας σε όλη τη διάρκεια της θεραπείας, δεδομένου ότι η απόλυτη μέτρηση επιτρέπει τη σύγκριση ανάμεσα στις μετρήσεις και όχι σε ένα μόνο στιγμιότυπο.επειδή η απόρροια ποικίλλει, έτσι ώστε η επιβεβαίωση των ιστών να παραμένει κατάλληλη όταν η κλινική εικόνα διαφωνεί.

Προδιαγραφές και υποβολή εκθέσεων

Επιβεβαιώστε τον απαιτούμενο όγκο αίματος, το όριο ανίχνευσης που εκφράζεται ως κλάσμα μεταλλαγμένου αλληλού και τον αριθμό των αντιγράφων DNA που ανακρίνονται ανά αντίδραση, καθώς μια χαμηλή εισροή υποβαθμίζει σιωπηλά την ευαισθησία.Οι αναφορές πρέπει να δίνουν απόλυτες μετρήσεις μεταλλαγμένων και άγριων τύπων παράλληλα με το κλάσμα, να ονομάσει κάθε υποκατάσταση ξεχωριστά και να καταγράψει εάν η εισροή έχει πέσει κάτω από το επικυρωμένο κατώτατο όριο.

Αποθήκευση και προμήθεια

Το αίμα που αντλείται σε τυπικούς σωλήνες EDTA πρέπει να φτάσει στο σημείο διαχωρισμού μέσα σε ένα σύντομο καθορισμένο παράθυρο, που διατηρείται σε 2-8 °C κατά τη διαμετακόμιση,δεδομένου ότι η διάσπαση λευκοκυττάρων πλημμυρίζει το δείγμα με άγριο DNA και θάβει το σήμαΟι σωλήνες σταθεροποίησης κυττάρων επεκτείνουν αυτό το παράθυρο και αξίζουν το τίμημά τους σε διασκορπισμένα δίκτυα συλλογής.Τα γραπτά προγράμματα αποστολής και τα τεκμηριωμένα διαστήματα από την ανάληψη έως τον διαχωρισμό είναι πιο σημαντικά εδώ από οποιαδήποτε άλλη εξέταση με βάση τους ιστούς..

Γενικές ερωτήσεις

Ε: Γιατί να επιλέξετε την ψηφιακή PCR έναντι ενός ευρέος πάνελ αλληλουχίας όταν υπάρχει υποψία ανθεκτικότητας;Όταν το ερώτημα είναι αν υπάρχει μια γνωστή υποκατάσταση, η καταμέτρηση διαχωρισμού φτάνει σε χαμηλότερο όριο ανίχνευσης και επιστρέφει ταχύτερα από την ευρεία αλληλουχία.Επιλέξτε ένα ευρύ πάνελ αντ'αυτού όταν η διαδρομή διαφυγής είναι πραγματικά άγνωστη.

Ε: Τι σημαίνει ένα εύρημα C797S για την επόμενη σειρά θεραπειών;Υποδηλώνει ότι έχει συμβεί διαφυγή στο σημείο δέσμευσης που στοχεύεται από τους αναστολείς τρίτης γενιάς, οπότε η συνέχιση του ίδιου παράγοντα είναι απίθανο να βοηθήσει.Το αποτέλεσμα θα πρέπει να συζητείται με βάση τις τρέχουσες οδηγίες θεραπείας και όχι να θεωρείται ως οδηγία συνταγογράφησης..

Ε: Πόσο γρήγορα πρέπει να φτάσει το πλάσμα στο εργαστήριο για να διατηρηθεί το κυκλοφορούν DNA χρήσιμο;Με την τυποποιημένη συλλογή EDTA, το διάστημα από την ανάληψη έως τον διαχωρισμό μετριέται σε ώρες και όχι σε ημέρες.Επιβεβαιώστε το παράθυρο που αναφέρει ο πάροχος και επικυρώστε τον ταχυμεταφορέα σας σε σχέση με αυτό πριν δεσμεύσετε τους τόπους συλλογής στη ροή εργασίας.